兒科臨床醫(yī)學論文
摘要:目的:探討肺炎支原體(MP)咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應(PCR)法和血清MP被動凝集法(MP-Ab)等方法在兒童MP感染診斷治療過程中的敏感性方法?采用3MP檢測法對362例臨床擬診呼吸道(非細菌性)感染的患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究,每患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和PCR,同時取血清做MP-Ab檢測,對3種方法的檢測結果與臨床診斷治療病例進行回顧性分析。結果?回顧臨床病例診斷MP感染患兒152例。MP快速培養(yǎng)法檢出陽性78例,陽性率為51.3%,病程為(4.5±2.6)天;PCR法檢測出陽性103例,陽性率為67.8%,病程為(6.2±3.5)天;MP-Ab法檢測出陽性127例,陽性率83.5%,病程(8.1±4.5)天。結論?3種MP檢測法的敏感性與病程有相關性,臨床醫(yī)生應根據(jù)患兒病程選取檢測方法,以提高陽性檢出率和敏感性。
關鍵詞:肺炎支原體,快速培養(yǎng)法,咽拭子聚合酶鏈反應,血清抗體,配對研究
前言
肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)是嬰幼兒、青少年急道感染的主要病原體之一,臨床上表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征,其中約3%~10%可發(fā)展為支原 體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細菌等病原體引起的兒童呼吸道感染,給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3種MP檢測法對362例臨床 擬診為呼吸道(非細菌性)感染患兒的咽拭子和血清標本進行配對研究,通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實驗室診斷方法,以協(xié)助臨床準確做出診治。
第一章 文獻綜述
1.1肺炎支原體的定義
小兒肺炎支原體肺炎多見于5~15歲兒童,嬰幼兒患病常表現(xiàn)為毛細支氣管炎。多數(shù)為亞急性起病,發(fā)熱無定型,或體溫正常,咳嗽較重,初期為刺激性干咳,常有咽痛,頭痛等癥狀。X線改變明顯,多為單側病變,也可見雙側病變,以下葉為多見,有時病灶呈游走性,少數(shù)呈大葉性陰影;病程2~3周不等,X線陰影完全消失比癥狀消退更延長2~3周之久,偶有延長至6周者。
1.2肺炎支原體的發(fā)病機制
肺炎支原體肺炎(Mycoplasma Pneumoniae Pneumonia,MPP)的發(fā)病機制仍不十分清楚,目前主要有呼吸道上皮吸附作用、MP直接侵入和免疫學發(fā)病機制等學說,其中免疫調(diào)節(jié)異常在MPP的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用
1.3肺炎支原體的臨床表現(xiàn)
1.多數(shù)為亞急性起病,發(fā)熱無定型,或體溫正常,咳嗽較重,初期為刺激性干咳,常有咽痛,頭痛等癥狀。
2.可出現(xiàn)多系統(tǒng)多器官的損害,皮膚粘膜表現(xiàn)為麻疹樣或猩紅熱樣皮疹;偶見非特異性肌痛和游走性關節(jié)痛;也有表現(xiàn)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)損害、血尿及溶血性貧血等。
3.全身癥狀比胸部體征明顯。體檢肺部體征不明顯,偶有呼吸音稍低及少許干濕羅音者
1.4肺炎支原體的臨床診斷病原學診斷
肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)法優(yōu)于被動凝集法,在肺炎支原體肺炎感染的早期可提供重要的依據(jù),可做為臨床診斷MP感染的優(yōu)先試驗[8];氣管肺泡灌洗液MP-DNA測定不僅能診斷MP感染,且支氣管肺泡灌洗術可促進呼吸道癥狀的改善及體征恢復,且通過纖維支氣管鏡收集支氣管肺泡灌洗液MP-DNA,痰液MP-DNA及血清MP抗體檢測陽性率沒有差異。CRP的檢測是肺炎病原體的輔助診斷方法,一定程度可區(qū)分細菌性肺炎和支原體肺炎。聚合酶鏈反應(PCR)技術檢測MP具有可靠、特異性高的特點,逐漸成為早期特異診斷的有力武器。
1.5肺炎支原體的實驗室檢查
急性期MPP患兒血清hs-CRP、C3、CA、IgM、IgG明顯升高,IgA明顯降低;而恢復期hs-CR、IgG仍然較高,而IgM和IgA均沒有明顯變化,補體C3、C4在恢復期內(nèi)也沒有明顯變化,因此血清C-反應蛋白、免疫球蛋白和血清補體的監(jiān)測對診斷急性期或恢復期MPP有重要意義。MP-IgM和冷凝集試驗同時檢測可提高小兒支原體肺炎實驗診斷的準確率;支原體肺炎患兒外周血白細胞大多正常占80%,中性粒細胞增高占61%;65.6%患兒C-反應蛋白增高;53.6%患兒血沉增快;58.4%患兒心肌酶譜增高;24.0%患兒肝酶增高;16.8%患兒尿酸增高。5流行病學特點及進展MP肺炎發(fā)生率約為22.3%,9~12歲感染率最低,3~6歲最高,10~12月是發(fā)病高峰月,小兒支原休肺炎發(fā)病率有所上升,發(fā)病年齡有趨小傾向,秋冬季發(fā)病率高,肺炎支原體只要通過呼吸道進行傳播,尤其發(fā)病率較高的地區(qū),局部區(qū)域每隔3-5年可發(fā)生一次肺炎支原體感染,每2-6年可發(fā)生一次大范圍的肺炎支原體感染,每次感染的時間都持續(xù)較長,有的感染可持續(xù)一年左右,因此,有關部門一定要采取相應的預防措施,切斷呼吸道飛沫傳播途徑對控制疾病發(fā)生和流行具有重大意義?刂浦гw感染的發(fā)生和流行。
第二章 材料和方法
2.1樣本
收集黃河中心醫(yī)院檢驗科2013年1月1日~8月6日在兒科就診住院患兒病例,有呼吸道感染癥狀,已經(jīng)初診為非細菌性感染的患兒362例作為研究對象,其中男175例,女187例;年齡為2個月~12歲,病程為1~90天。
2.2方法
具體方法有:(1)用MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等3種MP檢測法對362例研究對象同時進行檢測,記錄結果。(2)通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP感染的例數(shù),并按年齡、病程和3種MP檢測法結果進行統(tǒng)計學分析。
2.3臨床診斷MP感染的診斷標準
按文獻[1]、臨床癥狀、體征標準,包括回顧性診斷——即患兒經(jīng)紅霉素治療有效,經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無效者等;以及實驗室檢查3種檢測法至少有一種陽性。病程計算方法:以病歷本記錄為準,即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算,到患兒來就診檢測時為止進行計算。
用Spearman檢驗;各年齡組間確診病例的陽性率比較用χ2檢驗;3種檢測方法陽性結果與病程之間的比較用q檢驗。
第三章 結果
3.1陽性樣本
經(jīng)過回顧性診斷,在配對研究組362例研究對象中有152例符合MP感染的診斷標準,即有152例確診病例,其中肺炎45例,支氣管炎56例,上呼吸感染49例,支氣管哮喘2例。MP快速培養(yǎng)法檢測出78例陽性,PCR法檢測出103例陽性,MP-Ab法檢測出127例陽性。
3.2結果分析
各確診病例的年齡分布,見表1。表1顯示兒童MP感染的年齡以3~4歲年齡段的病例最多,為46例,陽性率最高,為70.77%,與其余年齡組段比較P<0.05。3種檢測法的陽性檢測結果與年齡分布見表1,表1顯示3種檢測法與年齡之間差異無統(tǒng)計學意義,以3~4歲的年齡段與其余年齡組段比較差異無統(tǒng)計學意義,p>0.05。不同病程患兒3種檢測法的檢測結果,見表2,表2顯示MP快速培養(yǎng)法為陽性的患兒病程均值較短為(4.5±2.6)天,PCR法為陽性的患兒病程均值為(6.2±3.5)天,MP-Ab法為陽性的患兒病程均值較長為(8.1±4.5)天。3組之間兩兩比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。表1不同年齡組MP感染確診病例和3種檢測方法結果對比分析注:△□代表與年齡組3~4歲組段比較結果表2不同病程患兒3種檢測方法陽性結果對比分析注:△代表三組之間的兩兩比較。
第四章 討論
1.MP感染的臨床表現(xiàn)常無特異性,臨床的實際工作中,容易與一般病毒性感冒相混淆。在臨床上患兒有下列癥狀:(1)發(fā)熱呈弛張熱或不規(guī)則熱。刺激性咳嗽非膿性痰,偶帶血絲。(2)可有咽痛、頭痛、胸痛,全身癥狀比體征明顯。(3)肺部體征不典型而胸片炎癥顯著,可見云霧狀大片陰影。(4)WBC正;蛏。(5)青霉素類、磺胺類抗生素治療無效,改用或一開始用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素有效。(6)實驗室MP檢驗有1項或1項以上陽性具備以上2個條件或以上者可初步診斷為MP感染。多時候,臨床醫(yī)生為了盡快緩解患兒的癥狀,需根據(jù)患兒的癥狀、體征和病史做MP感染的診斷性治療,但應與肺結核相互鑒別。
2.近年來由于診斷技術的提高,MP感染報道日漸增多,一般認為MP感染以年長兒發(fā)病較多,本文表1資料顯示,2~8歲年齡段是發(fā)病的高峰期[2]。占同期呼吸免疫科住院患兒的9.3%,比有關文獻報道各年齡組支原體肺炎占肺炎發(fā)病的10%~20%低。說明MP感染的發(fā)病年齡有提前,且年齡越小,臨床表現(xiàn)愈不典型。
3.臨床實驗室檢測MP的方法很多,過去所用的冷凝集試驗法診斷MP感染缺乏特異性,敏感性也差,易受病程的影響[3]。本文采用配對資料研究,對疑為MP感染的患兒進行3種MP檢測法,以探討MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等方法在兒童支原體肺炎診斷治療過程中的敏感性。提示臨床醫(yī)生根據(jù)患兒不同的病程選取不同的檢測方法,以提高實驗室的陽性檢出率。
4.MP快速培養(yǎng)法是利用MP生長代謝產(chǎn)物使培養(yǎng)基液體中指示劑顏色發(fā)生改變來判斷MP生長;標本中的其他支原體和細菌則因培養(yǎng)基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。該法陽性結果可48h檢出。結果顯示,培養(yǎng)法陽性率為51.3%(78/152),低于另外兩種方法的陽性率?赡芘c在檢測前患兒已經(jīng)用了MP敏感藥物有關。表2結果顯示,該法陽性病例病程最短。提示病程時間較短的患兒選擇此方法對檢測的陽性率較高。MP培養(yǎng)是診斷MP的金標準[4]。
5.咽拭子PCR法檢測質(zhì)粒核酸,該法快速、敏感和特異,通過一技術可從患兒痰中檢測MP-DNA。由于此方法相當敏感,易受污染,故實驗室操作時應特別小心。統(tǒng)計結果顯示,該法的陽性率為67.76%(103/152),高于快培法。此法彌補了極微量的和被藥物殺死的MP不能通過快速培養(yǎng)法檢出的病例。表2結果顯示,該法陽性病例,病程為(6.2±3.5)天。詳細資料顯示,有病程在30天以上的患兒經(jīng)抗MP治療,該法仍可為陽性,說明MP的生存力相當強,要系統(tǒng)化治療。
血清MP-Ab法陽性率是3種檢測方法中最高的,為83.55%(127/152),該法是檢測患兒血清中的MP抗體,而非直截了當檢測MP本身,因而陽性結果并不能確診是MP感染。對患兒狀態(tài)的綜合評估應包括對患者臨床癥狀和試驗結果的嚴謹分析。極低量的抗體可能不被此試驗檢測出來。另外還有些MP感染的患者不產(chǎn)生抗體或只產(chǎn)生少量的抗體,高抗體滴度的樣品要出現(xiàn)前帶現(xiàn)象。表2結果顯示,該法陽性病例,病程最長,這是由于發(fā)病初期,機體中尚未產(chǎn)生抗體而不能被檢測出,提示發(fā)病時間較長或經(jīng)過多種藥物治療過的患兒選擇此方法有較高的陽性率。此檢測法結果往往受抗體出現(xiàn)的時相及患兒年齡、機體免疫系統(tǒng)狀況等多方面的影響。
結論
臨床應根據(jù)患兒的不同病程、不同年齡以及用藥情況來選取實驗室的檢測方法,以提高MP的陽性檢測率,以更好地結合臨床癥狀進行綜合分析,從而提高小兒MP感染診斷的準確率。
參考文獻:
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